如何判斷酶標條檢測結果準確性

　　酶標儀檢測通常基于化學發(fā)光和熒光的原理，測定結果以光學密度值或強度值呈現(xiàn)。要判斷酶標條檢測結果的準確性，首先需關注濾光片的質(zhì)量。濾光片的波長精度和峰值直接影響酶標儀的靈敏度和準確度，因此，定期用高精度紫外可見分光光度計檢測濾光片的波長精度是必要的。

　　其次，可通過檢測標準品來評估。例如，使用已知濃度的重鉻酸鉀和對硝基苯酚溶液，分別檢測其吸光度，并與預期值比對，以判斷儀器的靈敏度和準確度。

　　此外，還應考慮檢測器的質(zhì)量、通道差、孔間差、零點飄移以及儀器的精密度和穩(wěn)定性等因素。這些都直接影響酶標條檢測結果的準確性。

　　以下是判斷酶標條檢測結果準確性的系統(tǒng)方法：

　　一、實驗內(nèi)質(zhì)控標準

　　變異系數(shù)(CV)評估?

　　同一孔板內(nèi)重復樣本的CV值應<10%，若超過則提示移液誤差或污染可能。計算方式為：CV=(標準差/平均值)×100%。

　　空白對照扣除?

　　需用空白孔OD值校正樣本數(shù)據(jù)，消除非特異性結合干擾。校正后樣本OD值應顯著高于空白對照(通常≥2.1倍)。

　　標準曲線驗證?

　　標準品R2值需≥0.99，線性范圍覆蓋待測樣本濃度

　　各標準點回收率應在80%-120%之間

　　二、結果判讀方法

　　陽性判定值(Cut-off)法?

　　臨界值=陰性對照OD均值+3×標準差，樣本OD高于此值判為陽性。

　　信噪比(S/N)評估?

　　陽性樣本OD值需≥陰性對照OD均值的2.5倍。

　　三、設備與操作驗證

　　酶標儀性能檢測?

　　靈敏度：6μg/ml重鉻酸鉀溶液在450nm處OD值應≥0.01A

　　準確度：1mmol/L對硝基苯酚稀釋液在405nm處OD值應為0.395-0.408A

　　酶標板均一性測試?

　　包被IgG后，各孔OD值與均值偏差應<10%。

　　四、樣本可靠性指標

　　稀釋線性度?

　　樣本稀釋5倍后，測量值變化應在理論值的70%-130%范圍內(nèi)。

　　基質(zhì)效應排除?

　　加標回收率測試中，回收率80%-120%表明樣本基質(zhì)無顯著干擾。

　　建議每批次實驗同時運行陰/陽性對照及標準曲線，并定期校準酶標儀。

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